每噸飼料中分別添加0(對照)、172344516g酵母核苷酸製成實用飼料,來飼養蝦60d,並通過測定對蝦的增重倍數、成活率等生長指標,超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、過氧化物酶(POD)和溶菌酶(LZM)活性等免疫指標以及對低溫、低氧的耐受能力,來研究飼料中酵母核苷酸添加量對其生長、免疫和抗應激的影響。結果表明,飼料中添加酵母核苷酸可以顯著提高凡納濱對蝦的增重倍數和降低飼料係數。飼料中添加酵母核苷酸對凡納濱對蝦肌肉中ACP無顯著影響,但顯著增加了LZMSODPOD活性。與對照組相比,添加酵母核苷酸可以提高凡納濱對蝦耐低氧和低溫的能力,344g/t組和516g/t組比對照組出現死亡一半時的溫度下降了1℃。因此,酵母核苷酸具有顯著促生長和提高機體抗應激以及增強機體免疫能力的作用,建議在實際生産中的添加量爲344g/t較爲合適。
   

   尤其是高密度養殖和淡水養殖成功以後,養殖規模迅速擴大,養殖總產量逐年增加[12]。但在其養殖業蓬勃發展的同時,也暴露出一系列的問題,如生長速度減慢、病害問題日趨嚴重,所以開發新的免疫促生長劑成爲凡納濱對蝦營養與飼料研究的重點[3-6]
    核苷酸是生物體內遺傳物質的基本單位,也是蛋白質合成必需的中間體的基本單位。核苷酸促進畜禽的生長和免疫功能已經被證實[7-9],但核苷酸在水産上應用的報道還很少。苗玉濤等[10]在配合飼料中添加300g/t核苷酸時能促進蘇氏芒鯰的生長並提高了成活率; Burrells[11]發現,在飼料中添加300g/t核苷酸時,促進了大西洋鱒的生長並顯著降低死亡率。本試驗的目的在於探討酵母核苷酸對蝦生長、免疫以及抗應激的影響,爲酵母核苷酸在蝦配合飼料中的應用提供參考。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 酵母核苷酸
   1.1.2 試驗用蝦
   1.1.3 試驗地點
   1.1.4 試驗條件
    試驗在2m×2m×0.8m的小網箱中進行,試驗期間水深0.5m。網箱置於室內的水泥池中,網箱四周固定于池壁上。
    試驗用水爲海邊直接抽提的天然海水,經過沙濾,鹽度爲3234,試驗期間爲自然水溫,溫度爲2127℃。試驗整個過程連續充氣,溶解氧保持在6.0mg/l以上。
12 試驗方法
    試驗以酵母核苷酸添加水平爲試驗因數,採用單因素梯度法。添加量設3個水平,分別爲1組(172g/t)、2組(344g/t)和3組(516g/t),一個對照組(酵母核苷酸添加量爲0),每組設4個平行。
13 日常管理
    試驗期間投飼率爲其體重的6%8%,具體根據蝦的攝食情況,每天進行調整。每天分3次投喂,分別在80012001600。每天收集殘餌和汙物一次,每周換水一次,換水量爲30%50%
14 試驗時間
    試驗時間從2005101日到1130日,共60d。試驗結束時每個平行逐尾記錄蝦的尾數,計算成活率,並稱量全部體重。
    增重倍數=(末重-初重)/初重;
    餌料係數=攝食飼料的重量/蝦體重增加量;
    成活率=收穫尾數/放養尾數×100%
1.5 抗應激試驗
1.5.1 耐低氧能力試驗
    試驗結束後,每個網箱隨機抽取30尾,置於密閉的有一定水體的塑膠袋中,測定並記錄每組蝦死亡一半時的時間。
1.5.2 耐低溫試驗
    試驗結束後,每個網箱隨機抽取30尾置於有一定水體的玻璃缸中,用冰塊緩慢降低溫度,記錄受試蝦死亡一半時的溫度。
1.6 非特異性免疫指標的測定
    試驗結束後,每個網箱取3尾蝦的部分肌肉,稱重後於冰浴中勻漿,加入無菌生理鹽水,使濃度達到0.1g/ml,於4℃條件下,以4 000r/min離心10min後,除去沈澱即爲凡納濱對蝦肌肉組織提取液。
    選用超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、過氧化物酶(POD)和溶菌酶(LZM)作爲非特異性免疫指標。SODACPLZM採用試劑盒測定(試劑盒購自南京建成生物研究所,具體測定步驟按說明書進行);過氧化物酶活性的測定參照Worthington法測定,POD的活性(U/ml)=(E510×3×10)/(6.58×0.1)
    式中:E510爲波長510nm處每分鐘內吸光度的降低值;3爲反應體積;10爲稀釋倍數;6.58爲波長510nm1μmol底物的吸光度;0.1爲檢測體系中過氧化物酶活力。
1.7 資料處理
    所有資料均採用SPSS統計軟體進行分析處理,利用方差分析(ANOVA)來檢驗各組之間的顯著性。
2 試驗結果
21 添加酵母核苷酸對蝦生長的影響(見表1
    從表1可以看出,飼料中添加酵母核苷酸對凡納濱對蝦的生長有顯著影響。試驗組的增重倍數均比對照組有所提高,特別是3組比對照組提高了39.4%。成活率除1組外,各試驗組和對照組沒有顯著差異。證明在飼料中添加酵母核苷酸可以提高對蝦的生長速度。

22 添加酵母核苷酸對蝦飼料係數的影響
    飼料係數是評價飼料質量的一項重要指標。從表1可以看出,對照組的飼料係數爲1.27,而試驗組均比對照組有所下降,3組比對照組下降了6.3%。統計結果分析,1組和2組與對照組沒有顯著差異,但與3組存在著顯著差異。證明在飼料中添加516g/t的酵母核苷酸可以提高飼料利用效率,降低飼料係數。
23 添加酵母核苷酸對提高蝦耐低氧的影響(見表2

    從表2可以看出,在一定的水體中(1L),對照組死亡達到一半時的時間最短,2組和3組差別不是很大。
24 添加酵母核苷酸對蝦耐低溫的影響
    隨著用冰塊緩慢降低溫度,凡納濱對蝦逐漸開始出現死亡。由於在飼料中添加了不同含量的酵母核苷酸,出現死亡一半時的最低溫度也不盡相同。2組和3組比對照組出現死亡一半時的溫度下降了1℃,結果見表3

25 添加酵母核苷酸對蝦非特異性免疫功能的影響
2.5.1 添加酵母核苷酸對肌肉中酸性磷酸酶(ACP)活性的影響
    在飼料中添加酵母核苷酸,蝦肌肉組織提取液中ACP活性的測定結果如表4所示。肌肉中的ACP活性雖然有所上升,但與對照組蝦相比,沒有明顯差異。

2.5.2 添加酵母核苷酸對肌肉中LZM活性的影響
    在飼料中添加酵母核苷酸,蝦肌肉組織提取液中LZM的測定結果見表4。試驗組蝦肌肉中的LZM較對照組有所上升,統計結果表明,試驗組和對照組之間存在顯著差異。
2.5.3 添加酵母核苷酸對肌肉中SOD活性的影響
    在飼料中添加酵母核苷酸,蝦肌肉組織提取液中SOD活性的測定結果見表4。試驗組蝦肌肉中的SOD活性較對照組有所上升。統計結果表明,試驗組和對照組之間存在顯著差異,並且2組和1組、3組之間也存在顯著差異。
2.5.4 添加酵母核苷酸對肌肉中POD活蝦影響
    在飼料中添加酵母核苷酸,蝦肌肉組織提取液中POD活性的測定結果如表4所示。試驗組肌肉中的POD活性較對照組有所上升。統計結果表明,除1組和對照組之間不存在顯著差異外,2組和3組之間均與對照組之間存在顯著差異。
3 討論
3.1 關於免疫促生長劑的給予方法
    免疫促生長劑因具有有效地改善機體免疫能力、促進生長以及良好的抗應激能力,近十幾年來在水産養殖中有著廣泛的應用。實際使用時,有不少外源因素和內在因素影響著免疫增強劑的應用效果。其中一個最重要的因素就是作用方式的選擇,即使是同一種物質,不同的使用方法(如注射、浸泡和口服等)也會産生不同的效果。在不同的使用方法中,注射法被視爲是一種最爲有效的方法,包括腹腔注射和靜脈注射,而腹腔注射相對好操作,易於被採納;浸泡法一般用於幼體或較小個體,其使用在一定程度上受到個體大小的限制;在實際生産操作中,口服法因可操作性強、不受水産動物個體大小限制以及不給機體帶來應激反應等優點,被視爲是最爲合適、最易被接受的一種操作方式[1213]。基於這一點,本次試驗將酵母核苷酸添加到飼料中,通過口服方式驗證其作用效果。
3.2 關於添加免疫促生長劑對生長的評價
    目前,對生長的評定主要還是通過在室內或室外養殖一段時間,然後測量體長、體重以及成活率作爲指標。規格大、産量高,說明添加劑的效果好,這是最直接的方法[5]
    飼料係數是用來衡量配合飼料的質量好壞以及魚、蝦對配合飼料的利用程度。用飼料係數評定飼料質量的好壞較爲準確可靠,因爲它綜合了有關配合飼料質量的各項指標以及魚蝦本身對配合飼料的利用程度[14]
3.3 關於非特異性免疫評價
    利用給予各種免疫啟動劑的方法,通過提高水産養殖動物的免疫功能和免疫調節能力而達到預防傳染性疾病的目的,已經爲國內、外衆多研究者所關注[15-17]。在評價免疫啟動劑對水産動物免疫系統的啟動效果時,常用的指標是能否增強吞噬細胞活性、對淋巴細胞的促分裂作用、啟動補體和溶菌酶的效果以及促進抗體生成的作用等[8],在本次試驗中,採用了ACPSODLZMPOD等活性變化作爲評價指標。SOD是一種重要的抗氧化酶,可清除超氧陰離子自由基,使自由基的産生與消除處於一個動態平衡狀態,從而減少超氧陰離子自由基對生物體自身的損傷。ACP是巨噬細胞內溶酶體的標誌酶,是溶酶體的重要組成部分,已經有研究結果證明,在甲殼動物血細胞進行吞噬和包圍化的免疫反應中,會伴隨有ACP的釋放。POD廣泛存在於動物、植物及微生物體內,是生物體內重要的酶類之一,參與多種生理代謝反應。溶菌酶又稱細胞壁質酶,廣泛存在於自然界動物、植物和微生物的組織、體液以及分泌物中。溶菌酶在引發和維持機體防禦免疫的過程中起著重要的作用,它在機體免疫過程中除了溶解細菌細胞壁外,還可誘導和調節其他免疫因數的合成與分泌。
本次結果證實了在飼料中添加酵母核苷酸可以顯著提高蝦肌肉組織中的LZMSODPOD活性,提高機體免疫水平;ACP的活性則沒有顯著差異,可能原因是ACP在不同組織中含量分佈有關。
3.4 酵母核苷酸的適宜添加量
    從以上結果可以看出,在飼料中添加酵母核苷酸的對蝦,無論是增重倍數、飼料係數,還是抗應激以及提高非特異性免疫方面均顯著優於對照組。酵母核苷酸具有顯著促生長、提高機體抗應激以及增強機體免疫能力的作用。結合生長和免疫兩方面考慮,建議適宜的添加量爲344g/t

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